基因编辑发展历程
最早期的基因编辑研究与内源性细胞同源重组修复途径有关。这一途径能够被用于替换活细胞中一小部分基因组。要想使用这一基因编辑策略,外源DNA序列必须与目标DNA位点具有同源性。不过,这一初级版的基因编辑技术效率非常低,且会诱发不良的基因编辑事件。相比整合到预期位点,外源DNA序列更频繁地插入到了基因组的随机位置。
Figure 1. Genome Editing UsingDoubleStranded Breaks 图片来源:Cell
1989年和1994年相继发表的两项研究在克服这一技术的限制性方面取得了关键的进展。研究发现,使用meganuclease(一种能够识别和切割长DNA序列的核酸内切酶)引入双链断裂(double-stranded break,DSB)到基因组位点中能够刺激同源驱动的DNA整合(图1A)。这种‘‘homology-directed repair’’(HDR)策略增加了基因编辑的有效性。
然而,尽管在这方面有了突破,但彼时的基因组编辑依然有2个主要的缺点。第一,非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)也会发生在DSBs位置,且通常比HDR更有效,这会导致在目标位置发生随机插入和删除(图1A)。克服这一障碍是当前研究的热点,在这一综述中,作者们也进行了讨论。
第二,meganuclease切割特定目标位置的几率很小。为了解决这一问题,研究人员转向了锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(transcription-activator-like effector nucleases ,TALENs)。研究表明,经设计的ZFNs 和TALENs在编辑目标基因组位点中表现出了极高的特异性(图1B)。它们与近几年出现的CRISPR-Cas9技术组成了基因编辑工具的三大家族。
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