对化学药物复方制剂的杂质研究思路

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问题产生的背景：目前复方制剂在药品注册申请中已占有相当比例。复方制剂含有两种或两种以上药物，涉及的杂质来源及种类等复杂多样，致使其杂质研究较单方制剂要复杂得多，该部分的审评也是该类药物审评的重点和难点，同时也是经常需以补充资料的形式完善药物质量研究的问题之一。对于复方制剂的杂质研究，已公布的杂质研究技术指导原则中未予具体涉及。为了对复方制剂杂质研究做出恰当的评价，提高相关品种的审评质量，引导研发水平的进一步提高，药审中心在调研分析国内外相关研究工作现状、复方制剂杂质研究特点等的基础上，初步对化学药物复方制剂杂质研究的基本思路进行了梳理，并作为共性问题上网与药品研发及申报单位进行交流，以进一步收集信息，完善对复方制剂杂质研究方面的认识。拟讨论的重点问题： 1、已发布的杂质研究技术指导原则在药品实际研发工作中的应用情况。 2、附件中关于复方制剂杂质研究的基本思路的科学性及可行性。 3、对复方制剂杂质研究基本思路的进一步修订完善建议。 4、复方制剂杂质研究相对于原料药及单方制剂，重点是进行杂质来源归属研究，并在此基础上制定检查方法及相关限度。目前实际工作中在杂质来源归属研究方面存在的主要困难和解决措施。 附件：化学药物复方制剂杂质研究的思路（讨论稿） 一、前言目前复方制剂在药品注册申请中已占有相当比例。复方制剂含有两种或两种以上药物，涉及的杂质来源及种类等复杂多样，致使其杂质研究亦较单方制剂要复杂得多，该部分的审评也是该类药物审评的重点和难点，同时也是经常需以补充资料的形式完善药物质量研究的问题之一。为了对复方制剂杂质研究做出恰当的评价，提高相关品种的审评质量，引导研发水平的进一步提高，药审中心在调研分析国内外相关研究工作现状、复方制剂杂质研究特点等的基础上，提出以下化学药物复方制剂杂质研究的基本思路，供进一步讨论。复方制剂的杂质研究是以原料药及单方制剂的杂质研究工作为基础的，原料药和单方制剂杂质研究工作的相关要求也适用于复方制剂。SFDA已公布了《化学药物杂质研究技术指导原则》，该指导原则中的一般研究原则和要求同样也适用于复方制剂。因此，本文对杂质研究的一般要求和原则不再做详细讨论，有关问题可参阅相关指导原则。二、复方制剂杂质研究的特点复方制剂的杂质研究除应符合药物制剂杂质研究的一般性要求之外，还有以下特点： 1、复方制剂由两种或两种以上药物组成，其杂质包括各原料药中带入的杂质，各药物在制剂制备和储存条件下的降解产物，以及各药物之间以及药物与辅料可能的相互作用产生的降解产物。因此，复方制剂的杂质数目多，且其来源具有多样性。 2、由于复方制剂杂质数目多及来源多样性，使得杂质的分离检出、杂质的定性及定量研究工作更加困难。 3、复方制剂杂质的检查方法应兼顾不同来源的杂质，同时应重点监控稳定性较差药物的降解产物及有毒或有害杂质，因此检查方法的建立及限度的确定工作均较单方制剂要复杂得多。三、复方制剂杂质研究的基本思路复方制剂杂质研究的目的与单方制剂一样，是为了有效地控制制剂中杂质的含量，特别是控制有毒有害杂质的量不超过可接受的限度，并为制剂处方工艺选择、贮藏条件的确定提供有用信息。复方制剂进行杂质研究，首先应当采用适当的方法，分析确定各杂质的来源，对杂质进行定性研究和归属。因为杂质限度的确定必须以明确的归属为基础。对于有毒或有害杂质，明确归属的重要性是不言而喻的。即便对于一般的微量未知杂质，由于来源于不同主药其可接受的限量可能不同，一般也应当确定其来源，除非杂质的量小于制剂中含量最小药物可接受的未知杂质限量。复方制剂杂质研究采用的检测方法应能够有效分离各杂质，方法的灵敏度除应符合一般要求外，还要关注对制剂中含量较小的药物产生的杂质的检出能力。（一）复方制剂杂质来源归属研究如上所述，复方制剂杂质的来源归属是杂质研究首先要解决的问题，也是不同于单方制剂杂质研究的主要方面。复方制剂杂质来源归属研究一般可从以下几个方面进行： 1、通过对原料药理化性质、化学结构特点、稳定性特点的分析，预测制剂中可能存在的杂质。由原料药制备过程引入的杂质（如残留的反应原料、中间体、副反应产物等）是制剂中杂质的来源之一。这部分杂质由于在原料药质量标准中已有相应的控制方法，故不是制剂杂质研究的重点关注对象。复方制剂中存在的由原料药引入的杂质，若在贮藏期间未见增加（即并不同时是降解产物），在制剂质量标准中可不进行控制。制剂中需重点关注的杂质是降解产物。通过对组成复方制剂各原料药化学结构、理化性质、稳定性等的分析，可初步预测复方制剂中可能存在的降解产物。例如存在酯键、酰胺键的药物易于水解，通过结构分析基本可以确定因原料药水解而产生的杂质。如含有对乙酰氨基酚的抗感冒复方制剂，应考虑有对氨基酚存在的可能。另外，原料药及单方制剂的稳定性试验结果对于复方制剂中杂质的预测也具有重要参考意义。原料药及单方制剂贮藏过程中容易出现的降解产物在复方制剂中一般也会存在。再如对原料药在高湿、高温、光照条件下稳定性及降解情况的了解，有助于确定不同制剂工艺（如有无湿法制粒、高温干燥/灭菌过程，是否避光等）可能产生的杂质；通过对各主成分化学结构的分析，可了解主药之间是否存在相互作用而产生杂质的可能性。 2、在对杂质分析预测的基础上，采用适当的试验方法，对复方制剂中杂质做进一步的归属研究。试验研究首先应当建立杂质分离方法。由于复方制剂杂质数目多及来源多样性，采用TLC法难以达到分离检出要求，故常用HPLC法进行杂质的检查。为了有效分离检出杂质，必要时应采用梯度洗脱方法，或采用不同的色谱条件对杂质进行分离检查。在研究建立了可行的HPLC方法，对复方制剂中各主药、杂质、辅料能够有效分离检出之后，可采用以下方法对杂质进行归属研究：（1）分别测定各原料药的HPLC图谱、原料药按处方比例混合物的HPLC图谱、辅料的HPLC图谱、原辅料混合物的HPLC图谱、以及制剂的HPLC图谱，对上述图谱进行对比研究，以确定制剂色谱图中辅料峰、由各原料药引入的杂质峰。另外，可通过比较各原料药的HPLC图谱与原料药混合物的HPLC图谱初步确定原料药之间是否有相互针用；通过比较原料药混合物的HPLC图谱、辅料的HPLC图谱以及原辅料混合物的HPLC图谱，可初步确定原辅料之间是否有相互作用；通过比较原辅料混合物的HPLC图谱与制剂的HPLC图谱，可初步确定制剂过程是否引起主药的降解和杂质的增加。如主成分若含有活泼的氨基、羧基、醛基，可能在生产过程中发生缩合反应，产生主成分之间的缩聚产物。（2）对各原料药、原料药按处方比例混合物、辅料、原辅料混合物、制剂分别进行光、湿、热影响因素试验，测定试验前后样品的HPLC图谱并进行比较分析，可明确制剂中各药物在强光、高温、高湿条件下的主要降解产物，对复方制剂中的降解产物进行归属，并可通过上述比较研究，基本确定药物与药物之间、药物与辅料之间在剧烈条件下是否存在相互作用，是否产生新的杂质。（3）对各原料药、原料药按比例混合物、辅料、原辅料混合物、及制剂分别进行稳定性加速试验（加速试验条件一般选择40℃，相对湿度75％），测定不同时间样品的HPLC图谱并进行比较分析，并与制剂长期留样试验样品的测定结果进行比较。通过这些研究工作，可进一步明确复方制剂中各杂质的归属，明确各药物在加速试验条件下及一般贮藏条件下的主要降解产物，为制定贮藏条件及质量控制重点建立基础。在上述试验研究过程中，除需重点考察各试验样品的杂质检查结果及色谱行为外，还要注意观察样品外观性状、主药含量等的变化，以与杂质检查结果相互印证。另外，通过上述试验研究过程，亦可进一步验证采用的检查方法及色谱条件是否可有效分离检出制剂中杂质。（二）复方制剂杂质研究具体方法的一般考虑由于复方制剂组分、主药结构及稳定性特点、含量等的不同，导致杂质的具体研究工作复杂多样。具体研究方法应结合具体制剂的特点和实际情况制定，难以制定比较统一的研究方法。以下是一些具体研究方法方面的一般性考虑。 1、杂质检测方法方面复方制剂由于杂质数目多及来源多样性，杂质检测方法一般应采用HPLC法。必要时还应结合HPLC、TLC、GC、HPCE、液相色谱－质谱联用等多种方法进行杂质检测。用HPLC法检测时，由于主成分及杂质理化性质的差异可能较大，色谱行为差异也较大，故一般要采用梯度洗脱或多种色谱条件。采用的色谱条件是否能有效分离、检出及测定杂质，是复方制剂杂质研究的难点之一。目前可用于HPLC法的检测器很多，应根据对杂质结构的分析进行选择。因大多数药物及杂质在紫外光区均有吸收，故UV检测器为常用检测器。对于在紫外光区吸收较弱或无吸收的杂质，可采用其他通用型检测器（如蒸发光散射检测器等）进行研究。在使用UV检测器时，应选用对各杂质均有较强吸收的波长作为检测波长，当一个测定波长无法兼顾所有杂质时，可选用不同波长分别测定。二极管阵列检测器(DAD)对复方制剂的杂质研究有着重要的意义。通过该检测器可获得各杂质在不同波长的紫外吸收信息，有助于判断杂质检测波长选择的合理性，并可进行峰纯度检查。 2、杂质定量方法方面采用HPLC法检查杂质时，常用的定量方法有杂质对照品法、加校正因子的主成分自身对照法、不加校正因子的主成分自身对照法和峰面积归一化法。复方制剂中的毒性杂质及已知杂质，宜采用杂质对照品法进行检查。若采用加校正因子的主成分自身对照法，应注意不同时间、不同仪器、不同实验室间相对保留时间的波动，以及当供试品中存在多个杂质而分离度又较差时可能造成杂质定位的困难。不加校正因子的主成分自身对照法有可能导致定量有一定的误差，该方法一般只在单一杂质含量均较少、无法得到杂质对照品进而获得校正因子、杂质结构（紫外吸收情况）与相应主药结构相似的情况下采用。采用加或不加校正因子的主成分自身对照法,对于明确归属的杂质，其计算方法可参照原料药及单方制剂的方法，即与各自的主成分进行对照。对于未能明确归属的微量未知杂质，采用主成分自身对照法时，建议与制剂中含量较小的主成分进行对照。当然这种计算结果仅仅是制剂中微量杂质控制的一个相对指标，并不确切反映制剂中杂质与主药比较的实际百分比。峰面积归一化法虽然简便快捷，但由于可能存在的主成分与微量杂质不在测定线性范围的现象，在复方制剂杂质研究中一般不宜采用。 3、方法学验证方面 采用不同的色谱条件分别考察各主药的杂质时，专属性研究既要考察溶剂、辅料是否对待测主药的杂质检测有影响，也要考察其他主药及其杂质是否对该条件下待测主药的杂质检测有影响。在同一色谱系统下同时考察各主药的杂质时，专属性研究应考察溶剂、辅料是否对各杂质检测有影响，各主药峰及各杂质峰是否能有效分离，各杂质是否能明确归属。方法学验证方面的其他要求，与原料药及单方制剂一致，可参照杂质研究的技术指导原则。 4、杂质的限度复方制剂杂质限度的确定与单方制剂一样，应以杂质的安全性研究结果作为基础。另外，也可参考各组分原料药的杂质限度、单方制剂的杂质限度作综合考虑，即在明确杂质归属以后，杂质限度可参照各组分原料药及单方制剂的杂质限度分别确定。复方制剂质量标准中有关物质检查项应重点控制毒性杂质及降解产物。对于由原料药引入的杂质，若在贮藏期间无明显增加（即并不同时是降解产物），在制剂质量标准中可不进行控制。 5、其他复方制剂中各主药的结构千差万别，其稳定性亦不尽相同，在经过严格的实验验证或有明确的文献资料支持下，可将杂质研究的重点转移到不稳定的主药上。复方制剂中若各主药含量相差较大，但稳定性均较好，可主要针对含量较大的主药进行杂质研究。但应有明确的试验或文献支持含量较小组分不会产生毒性的杂质。若可能产生毒性杂质，对毒性杂质应采用杂质对照品法进行研究控制。对复方氨基酸，多种维生素等复方制剂，应详细分析各组分的稳定性情况，有针对性地进行杂质研究。另外，含量变化趋势亦是杂质变化趋势的一种间接体现。对双层或多层片但不同片层仅含单一组分的复方片剂，或含有多种色泽颗粒且不同色泽颗粒仅含单一组分的复方胶囊剂等，如能采用物理手段将不同主药组分简单地分离，则可参照各主药单方制剂的杂质研究方法分别进行研究。