基于CRISPR,构建高通量编辑平台
去年,Marson团队首次在体外制备了CRISPR体系,并将其添加至捐赠的人类T细胞中,最终成功编辑了T细胞的特定基因。
今年,他们在去年的基础之上,开发了一个自动化系统,可以高通量、并行编辑T细胞。这一新方法能够让研究人员在成千上万个捐赠T细胞中编辑不同的候选基因,随后利用HIV感染这些突变的免疫细胞,以此筛选出防御病毒感染的关键基因。
尽管T细胞是免疫系统的主要“兵力”,但是它们只能够在体外生存数周时间。而这一系统的亮点则在于速度,克服了T细胞体外生存期短的缺陷。研究人员表示:“如果我们试图编辑T细胞,并将他们回输至患者体内。那么,这一系统将为其快速、安全和有效性提供黄金标准。”
研究人员利用新技术编辑了CXCR4、CCR5基因(编码不同HIV病毒株感染免疫细胞的受体分子)。结果发现,CXCR4基因或者CCR5基因失活,都能够封锁HIV病毒对人类T细胞的攻击。
此外,他们发现,同时抑制两个基因(一个基因负责病毒入侵免疫细胞,另一个基因确保病毒在宿主细胞中生存和扩增),能够让T细胞获得“双重保障”。
为了展示这一高通量编辑技术的有效性,研究人员挑选了45个与HIV病毒入侵宿主细胞能力相关的基因,对它们进行了146种不同的基因编辑处理。他们发现,当其中一些基因缺失时,会赋予HIV病毒耐药性。
|