婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定

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婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定
（乙酰氯—甲醇甲酯化法）

一、原理
乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸—甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，经气相色谱仪分离检测，外标法定量。
本方法依据《食品安全国家标准GB 5413.27—2010婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》方法中规定。

二、仪器和设备
1.万分之一电子天平
2.恒温热水浴槽
3.离心机：转速≥5000 转/分钟，离心管：50mL
4.GC-L6气相色谱仪，带FID 检测器，毛细管分流/不分流进样及尾吹系统
5.冷冻干燥仪
6.LF-12氮吹仪
7. PC2560毛细管柱（100*0.25*0.20）
三、试剂：

1.无水碳酸钠

2.甲苯

3.乙酰氯

4.乙酰氯甲醇溶液

5.碳酸钠溶液

6.脂肪酸甘油三酯标准品：纯度≥99 %

四、分析步骤
1.试样处理
试样含水量大于5%时，冷冻干燥至含水量小于5%。
称取试样0.5 g（精确到0.1 mg）于15 mL 干燥螺口玻璃管中，加入5.0mL甲苯。
称取无水奶油试样0.2g（精确到0.1mg）于15mL干燥螺口玻璃管中，加入5.0mL甲苯。
2.甲酯化提取
2.1试样测定液的制备
在试样中加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0mL，充氮气后，旋紧螺旋盖，振荡混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期间每隔20min取出振摇一次，水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至50mL离心管中，分别用3.0mL碳酸钠溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液于50mL离心管中，混匀，5000 转/分钟离心约5min。取上清液作为试液，气相色谱仪测定。
2.2标准测定液的制备
准确吸取脂肪酸甘油三酯标准工作液0.5mL于15mL螺口玻璃管中，加入4.5mL甲苯，其他操作步骤同2.1。

五、色谱参考条件
色谱柱：PC2560100m×0.25mm，0.20um
气源：氮气（99.999%）、氢气（99.999%）、空气（99.999%）
载气流速：1.0mL/min
进样口温度：260℃
分流比：30：1
检测器温度：280℃
柱温箱温度：初始温度140℃，保持5min，以4℃/min升温至240℃，保持15min
进样量：1.0μL

六、试样溶液的测定
分别准确吸取1.0μL脂肪酸标准测定液及试样测定液注入色谱仪，平行测定次数不少于两次，以色谱峰峰面积定量。

七、分析结果的表述
1.试样中各脂肪酸的含量的计算
试样中各脂肪酸的含量按公式（1）计算：

式中：
X i—— 试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100 g）；
Asi—— 试样测定液中各脂肪酸的峰面积；
mstdi——在标准测定液的制备（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯标准工作液中所含有的标准品的
质量, 单位为毫克（mg）；
Fj——各脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的换算系数，参见附录A 中的表A.1；
Astdi ——标准测定液中各脂肪酸的峰面积；
m ——试样的称样质量，单位为克（g）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
2.试样中总脂肪酸的含量计算
试样中总脂肪酸的含量按公式（2）计算：

式中：
XTotal FA——试样中总脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100 g）；
Xi ——试样中各脂肪酸的含量，单位为毫克每百克（mg/100 g）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
3.试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（%）的计算
试样中某个脂肪酸占总脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（3）计算：