新版实验步骤有四处变化 增加四个注意事项
5月2日,韩春雨课题组的论文《NgAgo DNA单链引导的基因编辑工具》在《自然-生物技术》网络版发表,随后引起了广泛关注。韩春雨小组得出的结果是以DNA来介导NgAgo(一种核酸内切酶)对靶向基因的识别从而进行基因编辑,被认为是基因编辑领域的一项重大突破。
韩春雨因此走红网络,被许多人视为在普通学校也能做出一流科研成果、耐得住寂寞搞科研的典型样本。同时有观点认为,NgAgo将取代CRISPR成为新一代主流的基因编辑技术。不过,韩春雨本人对此相当谨慎。他曾在接受媒体采访时表示,NgAgo系统和CRISPR都为基因编辑应用提供了更好的工具和多样化的选择,各有各的用处。
然而,在论文发表后的两个多月后,没有一家科研团队宣布成功重复出韩春雨的实验结果,使得这项新基因编辑技术受到极大的质疑。
8月8日,河北科技大学副教授韩春雨向非盈利性质粒共享信息库Addgene网站提交新版的详细实验方法,南都记者看到,其中一些实验步骤与其在《自然-生命科学》中发表的论文有所不同。
据“科学美国人”中文版《环球科学》的微信公众号“科研圈”介绍,新版实验步骤有几处变化:
1.血清品牌由 Hyclone 变更为Gibco;
2.增加了关于“293T 细胞贴壁不牢,换液时要小心操作”的小提示;
3.建议在质粒/gDNA共转染的时间从“24小时”变成了8小时、12小时或24小时后;
4.溶解和稀释质粒及 gDNA 的缓冲液从含有 EDTA 的0.5xTE变更为水(pH 8.0)。
此外,实验步骤之后还有“在实验前要仔细确认所使用的细胞株未被污染或污染已被彻底清除”、“在细胞消化和培养过程中要避免使用金属离子螯合剂 EDT。也可以在培养基中额外加入 5 mM或其他浓度的镁离子”等四条注意事项。
有研究者认为,新版实验步骤第三条提到的补转gDNA和第四条中缓冲液的变化,尤为关键。
值得注意的是,实验步骤后补充的四条注意事项中, EDTA 再次被强调。据了解,EDTA是一种金属离子螯合剂,可以螯合镁离子,而根据韩春雨补充的说明,镁离子恰恰是 NgAgo 系统发挥作用的必要条件。有学者认为,此前多国学者无法重复实验结果,或许就是EDTA“神不知鬼不觉”地产生了影响。
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